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主題標題：【文獻】三種毛氈苔的葉片與莖頂組織培養

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文章一覽：【文獻】三種毛氈苔的葉片與莖頂組織培養 (新回覆在最前面,最多列出 6 個)　 [列出所有回覆]

li3167 發表於： 2010/07/04 12:00pm

有沒有像似巫婆的感覺.........

biosaa 發表於： 2010/07/04 08:08am

下面引用由playerst在 2010/07/03 10:14pm 發表的內容：
是SCI論文嗎??
如果是說不定能從Introduction中的References中找到相關資料

這篇reference的文章都沒有北嶺...主要是Drosera rotundifolia比較多@@

下面引用由csyin在 2010/07/03 10:34pm 發表的內容：
MS培養基不會難配啦!
不就是配幾瓶濃縮液, 使用前稀釋就好了嗎?
如果更懶, Sigma有賣配好現成的MS medium.

之前沒有配過養液的時候覺得很困難，不過配過養液之後就發現MS真可愛...配了1L母液可以用上好幾個月，只要麻煩一次就好了@ˇ@

csyin 發表於： 2010/07/03 10:34pm

MS培養基不會難配啦!
不就是配幾瓶濃縮液, 使用前稀釋就好了嗎?
如果更懶, Sigma有賣配好現成的MS medium.

playerst 發表於： 2010/07/03 10:14pm

是SCI論文嗎??
如果是說不定能從Introduction中的References中找到相關資料

biosaa 發表於： 2010/07/03 10:06pm

[這篇文章最後由biosaa在 2010/07/04 08:12am 第 3 次編輯]

文獻來源：Kawiak, A., Krolicka A., Lojkowska E.. 2003. Direct regeneration of Drosera from leaf explants and shoot tips. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 75:175-178.

洗碗精的前言
毛氈苔種類多樣，組培的需求也各不相同，這篇論文針對三種毛氈苔進行不同的培養基成分、性質、有無添加植物賀爾蒙進行分析，找出適合它們的配方，您會發現，平平是毛氈苔，怎麼配方差這麼多！！？？

註：黑色的字是整理自原作者的文獻內容，綠色的字是洗碗精在下的附註唷！

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前言
毛氈苔是食蟲植物的一大宗，目前全球超過130個品種，但是受到濫採、濫墾的影響，已經日漸稀少，歐洲有些毛氈苔甚至被列入瀕危物種！毛氈苔植株具有1,4-naphthoquinones（Naphthoquinone，萘醌，C₁₀H₆O₂），用於治療呼吸道痙攣的症狀（antispasmodic of respiratory tract ailments）。已知組織培養能夠快速且大量地生產植株，有助於藥用、瀕危植物等的繁殖，在本文之前已經有文獻報導Drosera rotundifolia葉片的組織培養，本文則更進一步針對三個品種的毛氈苔組培進行探討。

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試驗設計
三種毛氈苔：
Drosera anglica-北半球溫帶地區，種子需經過冷積層才會發芽，不過本文對於種子萌芽並無多加著墨，關於D. anglica的發芽可以參考【文獻】打破D. anglica種子休眠的條件。
Drosera binata-叉葉毛氈苔，原產澳洲，無法自花授粉，本文利用葉片培育培植體。
Drosera cuneifolia-原產於南非好望角，可自花授粉，其他資料不詳。

三種處理：

5種培養基-MS、1/2MS、RM、VW、Fast。
7個比例的植物賀爾蒙-NAA與BA的含量從0μM、0.005μM、0.05μM、0.01μM、0.2μM 進行調配。
2種型態的培養基-固態或液態。

其他條件：
2% sucrose
35ml
固態培養基添加0.7% agar；液態培養基120rpm
溫度21±2ºC、16小時光照、亮度900 lux
5重複

種子消毒：
Drosera anglica、Drosera cuneifolia種子先以70%酒精浸潤10秒後以3%次氯酸鈣（CaCl₂O₂）消毒20分鐘，無菌水洗三次後播種。

葉片消毒：
Drosera binata葉片先以自來水洗淨，接著浸泡5%介面活性劑（其實就是泡洗碗精...）30分鐘後，以70%酒精浸潤10秒，再以1.25%漂白水（次氯酸鈉）消毒25分鐘，水洗三次後置於培養基上。
*作者葉片消毒時比較1%氯化汞（HgCl₂）10分鐘、3%次氯酸鈣（CaCl₂O₂）20分鐘、1.25%次氯酸鈉25分鐘的消毒效果，結論是次氯酸鈉清潔效果以及培植體存活率比較高。

發芽率：
4~6周後Drosera anglica發芽率62%、Drosera cuneifolia發芽率71%。

無菌播種萌芽八周後取培植體（葉片與莖頂）開始實驗。

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結果
實驗八周後統計成功產生芽點的培植體比例（Explant regeneration %，此處譯者統稱繁殖率）以及出芽數目（No. of shoots per explant，此處統稱產生幾個芽體）。

效果最佳的培養基以及植物賀爾蒙
Drosera anglica：Fast medium，0.05μM BA、0.005μM NAA，繁殖率（regeneration）可達87%，平均每個培植體產生約8.3個芽體。
Drosera binata：VW medium，不添加植物賀爾蒙，繁殖率81%，平均每個培植體產生約14.5個芽體。
Drosera cuneifolia：1/2MS，0.2μM BA、0.2μM NAA，繁殖率25%，平均每個培植體產生約6.4個芽體。

效果最佳的培養基型態
Drosera anglica：液態培養基添加植物賀爾蒙
Drosera binata：液態培養基不添加植物賀爾蒙
Drosera cuneifolia：固態培養基添加植物賀爾蒙

好，結束！

...喂不是啦！接下來是討論@@

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討論
Drosera anglica使用0.005μM的BA與NAA時，繁殖率可達92%，但是培植體平均僅產生7.2個芽體；使用0.05μM BA、0.005μM NAA，繁殖率雖然只有87%，但是平均每個培植體產生約8.3個芽體。算起來是後者產生的總量比較多。液態培養基增殖的效果較固態又高出一倍，固態培養基平均最高僅能產生8.3個芽體，但是改為液態培養基加入同量的植物賀爾蒙，繁殖率可高達90%，培植體平均產生16.4個芽體。
Drosera binata在不加植物賀爾蒙的情況下長得較好，加入賀爾蒙後反而抑制生長。液態培養基效果亦較佳，固態繁殖率僅有67%，平均產生7.4個芽體；液態培養基繁殖率達92%，平均產生13.6個芽體。
Drosera cuneifolia組培時會因為氧化發生褐化（oxidative browning）的情形，導致繁殖率僅有25%，產生的芽體數量也較少，可加入維生素C、PCP、cysteine等抗氧化劑來減緩這種狀況，作者表示加入維生素C的效果最佳，可以使繁殖率提高至60%。Drosera cuneifolia葉片以液態培養基培養的培植體全軍覆沒，全部褐化死亡，也就是說這個品種液態培養還需要更進一步研究。

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結論
小苗長到與當初培植體一樣大後出瓶馴化，作者表示根莖發育完整的小苗已順利移入泥炭土栽培（Plantlets with fully developed shoots and roots were successfully transferred to peat.），但是沒有發育完整的咧？文中就沒有提及了，這是比較看不懂的地方。

本文提供的表格僅呈現效果最好的培養基成分，例如D. anglica只有顯示它在Fast medium中對應添加不同植物賀爾蒙的效果，但是沒有顯示在1/2 MS裡面狀況究竟如何。以在下個人來說，要配置MS已經很麻煩了，不太可能有時間和空間再去配這麼多種培養基，因此D. anglica使用1/2 MS的效果如果不如Fast，但是也能有一定成功率的話，方便起見當然還是會通通用MS，作者沒有呈現所有的數據實在可惜（全部顯示的話會爆炸多...）。

總的來說，這篇4頁的文獻建立了一個指標，包含葉片消毒、植物賀爾蒙用量、類似的品種可能可以使用哪種培養基等等...，都可以作為參考。比較可惜的是沒有北嶺毛啊！叉葉毛這種隨便插隨便長的其實用不到組培的說...@@ 以上是這篇的報導，謝謝收看，歡迎討論囉！

本論壇言論純屬發言者個人意見，與 塔內植物園 立場無關